Co jsou srážky?

Sérologická kritéria pro systematiku – jedná se o vlastnosti a charakteristiky identifikovatelného mikroorganismu, založené na specifických reakcích interakce antigenů (složky pouzder, buněčných stěn, bičíků, DNA a toxinů) s protilátkami obsaženými v séru [2].

K vazbě dochází mezi antigeny a odpovídajícími protilátkami. Tento proces tvoří základ sérologické reakce. Název reakce pochází z latinského slova sérum (syrovátka) [2] .

Sérologické reakce

K provedení sérologických reakcí se používají séra obsahující protilátky. Při sérologické reakci je vždy známa jedna složka (složka) [2].

K provedení sérologické reakce se používá sérum získané z krve laboratorního zvířete imunizovaného odběrovým mikroorganismem (známého druhu a standardu). Toto sérum obsahuje protilátky specifické pro tento kmen. Výsledné sérum se používá v sérologických reakcích k identifikaci příbuzných bakterií nebo jiných mikroorganismů, které mají stejné antigenní prvky jako kmen obsažený v séru [2].

Sérologická systematická kritéria jsou jedinými znaky, podle kterých je patogen identifikován, když je nemožné nebo obtížné jej izolovat z infikovaného organismu [2].

Sérologické reakce, které umožňují snadnou a rychlou identifikaci mikroorganismu, zahrnují: aglutinaci, interpunkci, imunofluorescenci, enzyme-linked immunosorbent assay, radioimunoanalýzu [2].

Schéma přímé aglutinační reakce

Schéma přímé aglutinační reakce

Aglutinace

Aglutinace je schopnost aglutinů (specifických protilátek) vázat se na korpuskulární aglutinogeny obsažené v buňkách bakterií a jiných mikroorganismů, slepovat je do agregátů, které se vysrážejí v přítomnosti elektrolytu. Rozlišuje se aglutinace přímou a nepřímou (pasivní). reakce [1].

Sediment může být zrnitý nebo hrubý. Granulovaný je pozorován při aglutinaci bakterií, které nemají bičíky, vatovitý – u bičíkovitých bakterií [1].

Interpunkce

Precipitační reakce je agregace (sloučení do jednoho systému) protilátek (precipitinů) a rozpustných molekul precipinogenů [1].

Interpunkční reakce se projevuje zákalem čiré kapaliny, výskytem sraženiny ve formě sedimentu, prstence nebo jiných konfigurací [1].

Na rozdíl od aglutinační reakce musí být antigen pro srážecí reakci v molekulární formě. K vysrážení komplexů protilátky a antigenu z roztoku dochází pouze při ekvivalentních koncentračních poměrech interagujících molekul. Pokud je některého z činidel v přebytku, vytvoří se rozpustný komplex a reakce neproběhne. Precipitinogen má ultramikroskopickou strukturu a jeho koncentrace na jednotku objemu séra je vyšší než koncentrace protilátek. K vysrážení lehčích částic antigenu za vzniku viditelné sraženiny je tedy potřeba podstatně větší množství protilátek [1].

Srážecí reakce se provádí v kapalném a pevném médiu [1].

Imunofluorescence

Imunofluorescenční reakce (IFR) využívají specifičnosti imunologické reakce a citlivosti fluorescenční mikroskopie. Může být přímý nebo nepřímý [1].

Jedna složka imunitní odpovědi, obvykle protilátka, je označena (konjugována) fluorescenčním barvivem. Fluorescein isothiokyanát (FITC) obvykle poskytuje v ultrafialovém světle zelenou záři a tetramethyl rhodamin isothionát (TRITC) poskytuje oranžovo-červenou záři [1].

Pomocí RIF jsou detekovány a identifikovány následující:

• mikroorganismy v čistých a smíšených kulturách, v nátěrech otisků prstů;
• buňky ovlivněné viry, bakteriemi a jinými mikroorganismy;
• T a B lymfocyty, normální zabijácké buňky a další buňky imunitního systému [1].

Propojený imunosorbentní test

Enzymová imunoanalýza je založena na použití funkčně aktivní molekuly biologického enzymu. Komplex imunoreagentů s enzymy si zachovává vysokou specificitu imunoreagentů a schopnost enzymu rozkládat přidaný substrát za vzniku snadno detekovatelných produktů. V důsledku toho je možné zaregistrovat a kvantitativně zohlednit interakci imunoreagentu, například protilátek a antigenů [1].

V poslední době byly vyvinuty varianty enzymatického imunosorbentního testu, které umožňují kvalitativně i kvantitativně identifikovat imunoreagencie v tekutých médiích [1].

Radioimunoanalýza

Radioimunoanalýza je vysoce citlivá metoda založená na kompetitivní vazbě radioaktivně značených a neznačených protilátek a antigenů. Princip metody spočívá v tom, že se známé množství protilátek smíchá se známým množstvím značeného antigenu a testovaným vzorkem (obsahujícím neznámé množství antigenu). Antigen obsažený ve vzorku a standardně značený antigen se vážou na protilátky. Bylo zjištěno, že čím vyšší je obsah neznačeného antigenu, tím méně se značený antigen bude vázat na protilátky. Koncentrace antigenu v testovaném vzorku se hodnotí podle úrovně radioaktivity. Stejný přístup se používá pro stanovení koncentrace protilátek ve vzorku. V tomto případě se známé množství antigenu smíchá se známým množstvím standardně značených protilátek a testovaného vzorku [3].

Existuje další modifikace metody radioimunitní analýzy. Je založena na imobilizaci antigenu a protilátek na pevném nosiči [3].

Hlavní nevýhody metody: nutnost nákupu drahého zařízení a činidel a zajištění bezpečnosti při práci s radioaktivními izotopy [3].